bí quyết RP-HPLC
chẩn đoán hplc
trật tự ra khỏi cột
Hợp chất mang ái lực rộng rãi có pha động thì với khuynh hướng ra khỏi cột trước
Hợp chất mang ái lực phổ biến sở hữu pha tĩnh thì bị giữ lại lâu hơn trong cột và ra sau
dụng cụ và hoá chất
Máy móc và công cụ
Máy HPLC model LC-10A của hãng Shimadzu
Hoá chất
Catrige lọc có kích thước mao quản 0,45mm ; 0,2mm , bể siêu âm, tủ rét, máy điều nhiệt, tủ sấy, máy sinh khí nitơ, cột chiết pha rắn SPE-C18, và các công cụ thử nghiệm thông dụng khác. Dung dịch đệm được pha từ axit acetic và natri acetate, dung dịch được lọc qua màng lọc 0,45mm trước khi bơm vào cột sắc ký.Máy đo pHcác chất chuẩn PEN G, AMP.3H2O, CLO (Na), CEP.H2O, OXA, do Viện kiểm nghiệm Bộ Y tế ( 48A 2 Bà Trưng – Hà Nội) cung ứng và cung cấp.MeOH, ACN thuần khiết cho chạy HPLC Merck (Đức). Những hoá chất khác: axit acetic, natri acetate, axit boric, HCl, KOH trong sáng phân tách và nước chứa 2lần.
Máy đo quang quẻ phổ tử ngoại khả kiến UV-1650 PC
thăm dò những điều kiện chạy nhan sắc ký
tìm pha động
- Dung môi tiêu dùng MeOH, ACN,… và dung dịch đệm acetat
- Điều kiện dò hỏi ban đầu:MeOH/ACN/đệm acetat 10mM là: 15/15/70 ; pH = 4
- Tốc độ 0,8ml/phútsắm không gian vòng dòng
- phân tách thuốc kháng sinh chúng tôi tậu van bơm loại 6 chiều sở hữu diện tích vòng loại là 20Chọn cột Supelcosil RP-C18 kích thước 250mm×4,6mm tuyến phố kính hạt nhồi 5m của hãng Sulpenco-Australia được chọn để tách những chất trên.tìm pha tĩnh
- Điều kiện khảo sát: ACN/MeOH/đệm Acetat = 15/15/70. Tốc độ 0.8Ml/phút. Nồng độ đệm 10mM– 5,0.PEN G, CEP, AMP, OXA, Ctrật tự rửa giải của các b-lactam là :
- Tại pH = 3,5 các píc nhan sắc ký với sự khác nhau rõ ràng rệt về hệ số tách k’, sự tách rõ hơn, thời kì lưu ngắn hơn. Tương tự, thành tựu tìm pH = 3,5 cho các thử nghiệm tiếp theodò xét Công thức dụng dịch đệm CH3COOH/CH3COONa với nồng độ 10mM có khoảng pH đổi thay từ
- Ưu nhược điểm của bí quyết
Điện di mao quản sắc ký lỏng hiệu năng cao Điện hoá
- Xác định được trên nhiều - Xác định được trên nhiều - Chỉ 1 số đối tượng
đối tượng khác nhau đối tượng khác nhau điển hình
- Lượng mẫu phân tích nhỏ, - Lương mẫu phân tách nhỏ, - Thao tác đơn thuần thao tác thuần tuý thao tác phức tạp
- giá thành không cao - giá thành cao - giá tiền ít
- phân tách được rộng rãi chất - phân tích được phổ biến dòng - Chỉ phân tích từng dòng cộng 1 khi cộng 1 khi đơn lẻ
- ngừng phát hiện và định - ngừng phát hiện và định - dừng phát hiện và
lượng phải chăng lượng cao hơn phương định lượng cao
pháp điện di - KẾT LUẬNKhảo sát và chọn được thông số tối ưu cho công đoạn chạy sắc đẹp ký:một. Pha tĩnh: Cột Supelcosil RP-C18 có kích tấc hạt nhồi 5m hãng Sulpenco-Autralia
2. Pha động:
✓ pH = 3,5
✓ Tỷ lệ ACN/MeOH/đệm acetat là 10/20/70
✓ Nồng độ đệm 10mM
✓ Tốc độ 0,8ml/phút
3. Chạy đẳng mẫu
4. Nhiệt độ cột tách 30oC
5. Khoảng trống loại 20l
6. Detector đơn bước sóng tại 225nm
Nhận xét
Đăng nhận xét